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¿Cómo influyen los plásticos en su protocolo de PCR?

Monday, January 10, 2022
La reproducibilidad y la precisión toman un papel fundamental durante el protocolo de PCR, descubre con CAPP y MERCALAB los 5 elementos cruciales para el establecimiento del protocolo de PCR.

La Reacción en Cadena de la Polimerasa o PCR por sus siglas en ingles (Polymerase Chain Reaction) es una herramienta para la rápida amplificación (obtención de millones de copias) de fragmentos de ADN de interés.

Durante el desarrollo de la técnica de PCR hay dos puntos los cuales son cruciales para establecer un buen protocolo: Reproducibilidad y Precisión.

Estar en control de su protocolo de PCR significa obtener resultados en los que se puede confiar; resultados que son reproducibles y precisos.

Cuando se prepara el protocolo de PCR, se suele centrar en el templado de ADN, la mezcla de reacción (buffer, dNTPs, taq polimerasa), los primers, las sondas y el termociclador, como instrumento principal para llevar a cabo la técnica.

De lo que probablemente no se hace mención o no se toma tan en cuenta, es en los plásticos; las placas, tiras o tubos para PCR en donde se procesan las muestras.

Los diferentes laboratorios que realizan la técnica de PCR asumen la plena responsabilidad de la calidad de sus resultados. 

Un error podría tener consecuencias importantes para los resultados de su investigación, si con ayuda de esta técnica está desarrollando artículos o incluso para un paciente, si se esta utilizando PCR como complemento de diagnóstico.

El impacto de los plásticos de PCR en la reproducibilidad y precisión de su protocolo de PCR, es una variable que es posible de manejar si elige la mejor opción y la encuentra en CAPP y VIRESA las trae para ti.

Controlando su protocolo de PCR #1: La variable del plástico.

Hay dos parámetros básicos para medir el impacto de los elementos Plásticos en su protocolo de PCR: 

  • Exactitud, que es la temperatura media obtenida en todo el bloque termociclador; y

  • Uniformidad, que es la diferencia entre el pozo más caliente y el más frío. 

¿Cómo influyen los plásticos en su protocolo de PCR? 


#2: Recuperación completa de la muestra de ADN.

En el mercado se suele destacar la característica de una superficie interior muy pulida y no vinculante, pero la PCR no consiste en recuperar la totalidad del líquido incluido en la muestra. ¡Es la recuperación completa de ADN lo que importa en su protocolo de PCR!

Los plásticos para PCR de la línea Expell son antiestáticos. ¿Cómo afecta a la recuperación de la muestra de ADN?, bueno tanto los dNTPs como el ADN tienen carga negativa y la mayoría de los plásticos del mercado tienen carga positiva, esto traerá como consecuencia, que los plásticos comúnmente usados retengan los elementos de la sonda.

Los elementos plásticos de la línea Expell para PCR tienen carga cero, esto asegura la máxima recuperación de la muestra, ya que las biomoléculas no se “adhieren/pegan” a las paredes de plástico del tubo.


#3: Cierre de los tubos.

La mayoría de los tubos plásticos para PCR tienen un cierre de tapa estándar con los bordes rectos de la tapa siendo presionados en las paredes rectas del tubo.

Este tipo de cierre requiere mucha más presión, lo que resulta en "dedos dolorosos", especialmente si la operación de cierre-apertura es repetida continuamente durante la jornada laboral.

Los bordes del tubo y de la tapa de los plásticos de la línea Expell para PCR están doblados. Este diseño único e innovador de tubo con tapa asegura un cierre y apertura suaves, manteniendo el tubo a prueba de fugas al 100% durante todo el protocolo de PCR. ¡No más “dedos dolorosos” al abrir y cerrar los tubos! 

#4: Suavidad y flexibilidad del Plástico.

Hay múltiples tipos de mezclas de polipropileno (PP) utilizadas para la producción de plásticos para PCR. El tipo de plástico utilizado afectará a la comodidad del trabajo (operación apertura y el cierre), el ajuste del tubo en el bloque termociclador, así como la durabilidad del plástico.

Muchos de los plásticos PCR comúnmente usados se agrietan en el protocolo PCR.

La mezcla única de PP usada en los plásticos de la línea Expell para PCR hace que sean más fáciles de usar y evita que se agrieten con los cambios de la temperatura.


#5: Evaporación y conductividad térmica.

Los plásticos de pared delgada tienden a asociarse con una mejor conductividad térmica, lo cual es cierto, aunque hasta cierto punto. La pregunta crucial aquí es ¿Qué parte del tubo tiene paredes delgadas? ¿Las paredes laterales del tubo son delgadas, o es la parte inferior el fondo del tubo, el que tiene contacto con el pozo del bloque del termociclador?

El PP no es un material hermético a los gases, por lo tanto, cuanto más gruesa sea la pared lateral del tubo, menos gas escapará.

La conducción térmica se produce en el fondo del tubo, donde el tubo tiene contacto físico con el pozo del bloque, transfiriendo el calor.

Los plásticos de la línea Expell para PCR, son finos/delgados en el fondo y más gruesos en las paredes laterales, permitiendo la máxima conducción de calor y que combinado con el innovador cierre de la tapa reduce la tasa de evaporación a un rango inferior al 3%


#6: Ajuste del termociclador.

Cuando elija su plástico para PCR, preste atención a la altura del tubo; los termocicladores rápidos de PCR o qPCR funcionan mejor con tubos de bajo perfil de 15.6-16.6 mm. 

Los termocicladores estándar de PCR/qPCR funcionarán con tubos de perfil regular de 20.9-21.8 mm. Si se usa un tubo de perfil regular en un termociclador rápido, el tubo será aplastado.



Visita el Blog oficial de CAPP consulta 01/10/2020, recuperado: https://www.capp.dk/blog/pcr-protocol


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